实验室小型发酵罐染菌及其解决办Ψ 法

　　无菌操作都是相对的，没有绝对的无菌操作，无菌◤和染菌是一个概率问题，我们要把染菌的概率降低到最小，就能实现无菌培养。

　　所有可能染菌的情况和相应的解决办法

　　1.进气过滤器坏掉了↓，打□开过滤器夹套，查看过滤器是否有明显的裂缝，是否有发酵物料的堆积，是否有其他①杂质，是否有积水排不干净!

　　2.发酵罐有地方漏，保持正压，用肥皂泡检测，一把情况如【果整个 发酵过程中保→持正压，即便有漏点，也问题不大，尾气排气↓就是很大的一个 孔。但是进罐管道是绝对不能有漏点的!

　　3.发酵罐中死角，这一点比较重要，所有开口的地方〖，都要排查，拧下来，用酒『精擦洗。

　　4.机封，漏油，这个一般不可能出现

　　5.发酵灭菌操作

　　小发酵罐 灭菌不存在节约能源的问⌒　题，特别是好些小发酵罐不需要蒸汽接触，因此发酵灭菌相对容易，但还是有些地方容易出问题：

　　(1)蒸汽开⊙过猛，发酵罐假压力出▼现，特别是对于蒸汽进罐的发酵罐，加热过快，出口流量低，罐压迅速ㄨ上升，而管内冷空气没有排除干净，

　　刚开始罐底主蒸汽肯定是开到最大后往回打半圈，防止假♂压的关键在于排气阀的控制，升温阶◥段排气全开，至100℃以后，收一半排气，快接近120前收紧排气和进气，微调ぷ进排气，保压保温，经济节能。

　　(2)灭菌没有开搅拌，物料热传递效率慢，形成假压力，可以 在温度升】到90℃，多维持一∩会，有些时候为了保护电机，在温度升到100℃以上就会停止＠ 搅拌。

　　(3)蒸汽进罐不分主次，也容易出现假压力，特别是有些不该主要进蒸汽的地方，比如 管道在液面■以上的蒸汽进口，小罐一般不存▽在这个进口。

　　(4)存在没有灭到的地方，这一点对于刚接触发酵罐的新手比较容易发生， 可以︻把握一句话：所有进罐和出罐的管道阀门在灭菌的时候都必须是烫手的，可□　以用手试探一下!

　　(5)蒸汽△进和尾气阀门避免过大幅度调节，在灭菌阶段，过快调节 ，会出现压力波动较大，起泡沫等现象。

　　(6)尽量避免泡沫●过多，泡沫过多容易灭菌不彻底

　　(7)物料，对于容易结块的物料一定要注意操作，不能使其在罐▲内结块，小罐可以在外面提前溶解，再加进去!

　　(8)空气过滤器灭菌不彻底，根据发酵罐不同，要看蒸汽过滤器是否和发酵罐一起灭，是否有管道◥存在漏灭的地方，有没有吹干。

　　6.发酵接种和补料操作

　　接种补料是小罐染菌非常主要的一▓方面!

　　(1)如果 罐非常小，建议采用火焰接种，在较短的时间内接进去大量目的菌，可以减少染菌 可能性。但是在火焰接种操作的时候，要操作好，注意以▼下几点≡：①接种前将压力卸掉一个比较低的值，防止开盖后，直接 冲灭酒㊣精棉②酒精棉可以用80%以上的酒精，要多放点，防止冲灭 ③接种前，用酒精棉烧一下接种口附近，特别是对于一些 进口罐，没有设计比较好◢的接种口④开口后，可以适当增加 进气速度，防止外面的空气进去⑤控制╳手套上水的量，不要让其有滴水的情况出现，容易滴进罐里面⑥操作迅速 ，熟练，准确

　　(2)补料 ，检查补料过滤器是否完好，特别是对空间环境杂菌特别多的地方，很重要;补料♂管道有没有破裂;插针的位置加垫子，一般不会有染菌的问题。